Успенско-Николаевский собор — самый древний каменный храм, сохранившийся в Белгороде. Строительство его, по свидетельству Ивана Башилова, автора «Описание Курского наместничества» (1785 год), относится к 1692–1703 годам. Возведение собора осуществлялось силами солдат Белгородского гарнизона и московскими стрельцами во главе с Иваном Прокофьевым на средства прихожан. В алтаре собора сохранилась записка о том, что Петр I 15 июня 1701 года «…пожаловал на свое царское богомоление на строение каменныя церкви Успения Пресвятыя Богородицы да Великаго чудотворца Николы, что строитца в Белегороде в салдатской слободе вкладу сто рублев денег».
В 1889 году на месте северо-западной башни была выстроена круглая часовня в память избавления Государя императора Александра III и его августейшего семейства от опасности при крушении поезда 17 октября 1888 года у станции Борки под Харьковом. В начале 1930-х годов собор закрыли. После освобождения Белгорода от немецко-фашистских захватчиков здание переоборудовали под хлебопекарню. В нем также разместился трест «Росглавхлеб». В 1998 году собор передан Белгородской и Старооскольской епархии, Марфо-Мариинскому женскому монастырю.
Успенско-Николаевский собор представляет собой редкий для Белгородского региона оригинальный образец храма с асимметричным планом и барочным декором, характерным для позднемосковского зодчества.
Является объектом культурного наследия регионального значения.