С именем Андрея Рублева связана одна из самых значительных страниц в истории московской иконописи. Работы московских мастеров до XV века создавались в разной стилистике, зачастую кардинально отличаясь в трактовке образов. Рублеву же удалось объединить в одно целое русские и византийские традиции, разработать свой иконописный язык, который стал ведущим на протяжении всего XV столетия.

Андрей Рублев многое в своем творчестве почерпнул у Феофана Грека, с которым долгое время работал. Но мастеру были чужды исполненные драматизма суровые образы Грека, он тяготел к тому, чтобы в своих работах передать идеалы добра, красоты и духовности. Он отказался от чрезмерной утонченности византийских форм и архаичных приемов, который были традиционными для живописцев того времени. Художественные средства мастера служили передаче глубокой человечности образов и созданию тонкого поэтического чувства у зрителей.

В центре композиции иконы «Рождество Христово» — Богоматерь, облаченная в темно-красную ризу. Ее лицо повернуто в сторону, противоположную младенцу. Красное ложе повторяет очертания фигуры. Божественный ребенок, завернутый в белую ткань, возлежит в яслях. Головы осла и вола склонились к импровизированной колыбели, животные согревают дитя своим дыханием. В верхнем левом углу находятся изображения трех ангелов, поющих славу Господу, а с противоположной стороны художник разместил троих всадников-волхвов.

Пространство на иконе построено циклично — взгляд зрителя плавно перемещается к фигуре Иосифа в левом нижнем углу иконы. Супруг Девы Марии сидит в глубокой задумчивости, а перед ним стоит старец-книжник. В правом углу женщина-повитуха готовит воду для омовения ребенка. 

Освещает сцену Вифлеемская звезда, горящая над пещерой. Ее свет, традиционно изображенный в виде трех лучей, направлен на центр композиции. Воссиявшее светило словно указывает зрителю путь к Богомладенцу.

Мастер использует несколько цветовых оттенков: зеленый, желтый и белый. В целом вся икона написана яркими красками, что отражает радость, торжество всего видимого и невидимого мира от того, что родился Спаситель. В то же время цветопередача лишена излишней резкости, тона несколько приглушены и гармонируют друг с другом.